UniRed核酸染料（10,000×水溶液）

UniRed核酸染料特點:

n 無毒性：UniRed 獨特的油性和大分子量特點決定其不能(néng)穿透細胞膜進(jìn)入細胞内，所以無毒。實驗證明，該染料的誘變性遠遠小于EB。

n 靈敏度高：适用于各種(zhǒng)大小片段的電泳染色，對(duì)核酸遷移的影響小于SYBR Green I。

n 穩定性高： 适用于使用微波或其它加熱方法制備瓊脂糖凝膠；室溫下在酸或堿緩沖液中極其穩定，耐光性強。

n 信噪比高：樣(yàng)品熒光信号強，背景信号低。

n 操作簡單：與 EB 一樣(yàng)，在預制膠和電泳過(guò)程中染料不降解；而電泳後(hòu)染色過(guò)程也隻需30 分鍾且無需脫色或沖洗 ，即可直接用紫外凝膠透射儀觀察。

n 适用範圍廣：可選擇電泳前染色（膠染法）或電泳後(hòu)染色（泡染法）；适用于瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠電泳；可用于 dsDNA、ssDNA 或 RNA 染色。

n 與EB有相同的光譜特性，無需改變濾光片及觀察裝置：标準的 EB 濾光片或 SYBR 濾光片都(dōu)适用，使用與觀察EB相同的普通紫外凝膠透射儀觀察即可，在 300nm 紫外光附近可得到最佳激發(fā)。但是UniRed不能(néng)被(bèi)488 nm氩離子激光器或相似波長(cháng)的可見光完全激發(fā)，因此不推薦使用此類激發(fā)裝置的成(chéng)像系統。對(duì)于此類裝置，我們推薦您使用UniGreen，它和SYBR Green I的光譜相似，靈敏度相當，但更加穩定。

UniRed核酸染料的使用方法

1．膠染法（用法同EB）

（1） 制膠時(shí)加入UniRed 核酸染料（例如：每50mL 瓊脂糖溶液中加入5μL UniRed 10,000× 儲液，以此比例類推）。

（2） 按照常規方法進(jìn)行電泳。

注意事(shì)項：

n 此方法染色染料用量相對(duì)較少。500 μL染料大約可以做100塊 50mL的膠。

n 由于UniRed具有良好(hǎo)的熱穩定性，可以在熱的瓊脂糖溶液中直接添加，而不需要等待溶液冷卻。搖晃，振蕩或者翻轉以保證染料充分混勻。也可以選擇將(jiāng)UniRed儲液加到瓊脂糖粉末和電泳緩沖液中，然後(hòu)用微波爐或其他常用方式加熱以制備瓊脂糖凝膠。UniRed兼容所有常用的電泳緩沖溶液。

n 含有染料的預制凝膠溶液可以大量制備，并長(cháng)期保存直到使用。

n 此方法不适合預制聚丙烯酰胺凝膠，對(duì)于聚丙烯酰胺凝膠請使用泡染法。

2．泡染法

（1） 按照常規方法進(jìn)行電泳。

（2） 用H₂O將(jiāng)UniRed 10,000× 儲液稀釋約3,300倍到0.1M NaCl中，制成(chéng)3× 染色液。（例如將(jiāng)15μL UniRed 10,000× 儲液和5mL 1M NaCl加到45mL H₂O中）。

（3） 將(jiāng)凝膠小心地放入合适的容器中，如聚丙烯容器中。緩慢加入足量的3× 染色液浸沒(méi)凝膠。室溫振蕩染色30min左右，最佳染色時(shí)間根據凝膠厚度以及瓊脂糖濃度不同而略有不同。對(duì)于含3.5～10％丙烯酰胺的凝膠，染色時(shí)間通常介于30min到1h，并随丙烯酰胺含量增加而延長(cháng)。

注意事(shì)項：

n 用泡染法染色時(shí)，染料用量較多。單次使用的染色液可重複使用3次左右。

n 3× UniRed染色液可以大量制備，在室溫下避光保存直至用完。

n 如果總是看到條帶彌散或分離不理想，建議使用泡染法染色以确認問題是否與染料有關。如果染色後(hòu)問題依舊存在，則說(shuō)明問題與染料無關，請嘗試：降低瓊脂糖濃度；選用更長(cháng)的凝膠；延長(cháng)凝膠時(shí)間以保證邊緣清晰；改進(jìn)上樣(yàng)技巧或選擇泡染法染色。

特别提醒：

n 如果您使用的是紫外成(chéng)像儀，請選擇UniRed；如果您使用激光成(chéng)像儀或希望在可見光下觀測，請選擇UniGreen。

n 在極少數情況下，質粒經(jīng)某些酶切後(hòu)的DNA樣(yàng)品會(huì)出現拖尾和分辨率降低，此時(shí)建議同時(shí)嘗試兩(liǎng)種(zhǒng)染色方法以決定哪種(zhǒng)方法更加合适。