描述

Thermo Scientific LightShift化學(xué)發(fā)光EMSA試劑盒是一種(zhǒng)非常強勁且靈敏的檢測系統，通過(guò)進(jìn)行電泳遷移率實驗(EMSA)檢測蛋白質-DNA結合相互作用。這(zhè)個試劑盒包括用于建立和定制DNA結合反應的試劑，用于驗證體系的一組對(duì)照DNA和蛋白提取物，作爲探針去識别生物素标記靶DNA的穩定鏈黴親和素-HRP偶聯物，以及非常靈敏的用于檢測的化學(xué)發(fā)光底物。

LightShift 化學(xué)發(fā)光EMSA試劑盒的特點：

• 檢測胞核抽提物中低豐度蛋白的理想選擇
• 靈敏度超越放射性和地高辛檢測法
• 兼容之前建立的常規DNA-蛋白互作結合條件
• 包括EBNA對(duì)照系統，幫助新用戶建立一個适當的檢測體系，了解用于确定相互作用特異性的方法

LightShift EMSA檢測的原理與蛋白免疫印迹類似。生物素末端标記的雙鏈DNA與細胞核提取物或純化的因子共同孵育，之後(hòu)進(jìn)行非變性凝膠電泳。然後(hòu)將(jiāng)DNA快速（30分鍾）轉印至帶正電的尼龍膜上，進(jìn)行紫外交聯，然後(hòu)使用HRP标記的鏈黴親和素-HRP偶聯物檢測，再與底物孵育。從标記到獲得結果的整個實驗流程可以在一天内完成(chéng)。

蛋白與DNA之間的相互作用對(duì)于DNA複制、重組和修複、轉錄和病毒組裝等許多細胞進(jìn)程具有關鍵調控作用。電泳遷移率實驗(EMSA)是研究基因調控和确定蛋白:DNA之間相互作用的核心技術之一。

EMSA技術基于一個實驗發(fā)現：即在非變性聚丙烯酰胺凝膠或瓊脂糖凝膠電泳過(guò)程中，蛋白:DNA複合物的遷移速度比自由的DNA分子更慢。由于蛋白結合使DNA的遷移速率發(fā)生了偏移或延遲，這(zhè)個方法也被(bèi)稱爲凝膠遷移或凝膠阻滞分析。在EMSA技術出現之前，蛋白:DNA之間相互作用主要是通過(guò)硝化纖維素膜過(guò)濾實驗分析。

整個實驗中需要實驗者準備的是已純化的末端生物素标記的目标DNA，待檢測的蛋白提取物，尼龍膜和基本電泳設備。目标DNA可在合成(chéng)的同時(shí)進(jìn)行5'或3'端生物素标記，或在合成(chéng)之後(hòu)使用Thermo Scientific生物素3'末端DNA标記試劑盒（産品貨号89818）進(jìn)行标記。用戶可通過(guò)不同方法獲得胞核、胞質或全細胞蛋白提取物，包括Thermo Scientific NE-PER 核蛋白和胞質蛋白提取試劑盒（産品貨号78833）。

規格

内容及儲存

Sufficient For: 100 binding reactions and detection on 800 cm2of membrane (10 mini-gel blots)
• 10X Binding Buffer, 1 mL (store at -20°C)
• Biotin-EBNA Control DNA, 50 µL (store at -20°C)
• Unlabled EBNA DNA, 50 µL (store at -20°C)
• EBNA Extract, 125 µL (store at -20°C)
• Poly(dl·dC), 125 µL (store at -20°C)
• 50% Glycerol, 500 µL (store at -20°C)
• 1% NP-40, 500 µL (store at -20°C)
• 1 M KCl, 1 mL (store at -20°C)
• 100mM MgCl2, 500 µL (store at -20°C)
• 200mM EDTA, pH 8.0, 500 µL (store at -20°C)
• 5X Loading Buffer, 1 mL (store at -20°C)
• Stabilized Streptavidin-HRP, 1.5 mL (store at 4°C)
• Luminol/Enhancer Solution, 80 mL (store at 4°C)
• Stable Peroxidase Solution, 80 mL (store at 4°C)
• Blocking Buffer, 500 mL (store at 4°C)
• 4X Wash Buffer, 500 mL (store at 4°C)
• Substrate Equilibration Buffer, 500 mL (store at 4°C)