RNA回收和濃縮，小體積洗脫

• 有效回收酶反應RNA

• 可濃縮少量RNA至10 μl

• 可回收不同方法純化的RNA

• 15分鍾即可獲得高品質RNA

RNeasy MinElute Cleanup Kit使用基于矽膠膜技術的特制RNeasy MinElute離心柱，可回收并濃縮來自于酶反應體系或其他樣(yàng)本中的RNA。該試劑盒還(hái)可用于RNA樣(yàng)本脫鹽。可以將(jiāng)至多45 μg的RNA純化至10 μl的體積中。整個純化流程可在QIAcube全自動核酸純化儀上自動完成(chéng)。

高效去除real-time RT-PCR抑制劑。

不進(jìn)行回收，抑制劑會(huì)導緻real-time定量時(shí)RNA量被(bèi)低估。采用酸酚法從HeLa細胞中分離總RNA，并使用或不使用RNeasy MinElute Cleanup Kit進(jìn)行回收。使用圖示體積的RNA洗脫液，按圖“RNA濃縮”中所述進(jìn)行real-time RT-PCR。利用獲得的C_T值計算RNA量。

Performance

RNeasy MinElute Cleanup Kit可純化高品質總RNA，無雜質或酶抑制物，其A ₂₆₀ /A₂₈₀比值爲1.9–2.1（參見"High-quality RNA"） 。相當于少于一個細胞的RNA的量（少至1 pg）也可以被(bèi)濃縮（參見"Concentration of RNA"）。可以純化大量的RNA（至多45 µg），适用于敏感的分析（參見"Reliable cleanup of RNA"）。在下遊應用中可采用小量反應體積，确保提高反應效率。該試劑盒可獲得高純度的RNA，可使更多的樣(yàng)本用于反應中，且無抑制作用（參見"Efficient removal of real-time RT-PCR inhibitors"）。

Principle

RNeasy MinElute Cleanup Kit專爲從酶反應（如标記、體外轉錄）中純化和濃縮RNA而設計，通過(guò)乙醇沉澱和有機提取方法分離RNA，并使RNA樣(yàng)本脫鹽，濃縮矽膠膜操作流程制備的RNA（如，PAXgene Blood RNA制備）。RNeasy技術結合異硫氰酸胍裂解和矽膠膜純化，簡化了總RNA純化技術。

Procedure

異硫氰酸胍裂解緩沖液和乙醇加至樣(yàng)本中，創造促進(jìn)RNA選擇性結合到RNeasy MinElute膜上的條件。然後(hòu)將(jiāng)樣(yàng)本上樣(yàng)到RNeasy MinElute離心柱。RNA結合到矽膠膜上，污染物被(bèi)高效洗去，用水洗脫得到高品質RNA。

同步回收和濃縮酶反應産物或粗RNA制備樣(yàng)本，可在15分鍾内完成(chéng)。相較而言，尤其是從小樣(yàng)本中，耗時(shí)的乙醇沉澱濃縮和回收會(huì)導緻RNA損失。RNeasy MinElute操作流程比真空離心更快，僅離心而無需脫鹽和去除其他雜質樣(yàng)本。RNeasy MinElute離心柱獨特的設計确保將(jiāng)純化得到的RNA濃縮至10 µl，用于生物芯片分析和real-time RT-PCR等下遊應用。整個純化流程可在QIAcube全自動核酸純化儀上全自動進(jìn)行。

Applications

RNeasy MinElute技術純化得到高品質RNA，适用于各種(zhǒng)下遊應用，包括：

• Northern印迹、點印迹和狹縫印迹

• 終點法RT-PCR

• 定量real-time RT-PCR

• 芯片分析

• Poly A⁺ RNA篩選